ارزیابی کارایی نانو ذرات لیپوزومه مغناطیسی به عنوان حامل پاکلی تاکسل در سرطان تخمدان: یک مطالعه برون تنی

Transcript

1 مجله تازه های بیوتکنولوژی سلولی - مولکولی دوره ششم شماره بیست و چهارم- پائیز 1395 ارزیابی کارایی نانو ذرات لیپوزومه مغناطیسی به عنوان حامل پاکلی تاکسل در سرطان تخمدان: یک مطالعه برون تنی 1 سارا یوسفی علداشی ۱ عظیم اکبرزاده * 2 امیر حیدری نسب 1 دانشکده 1. فنی و مهندسی دانشگاه آزاد اسالمی واحد علوم و تحقیقات تهران تهران ایران 2 بخش 2. پایلوت بیوتکنولوژی انستیتو پاستور ایران تهران ایران چکیده سابقه و هدف: با گسترش دانش پیرامون سرطان پیشرفت های زیادی نیز برای درمان آن صورت گرفته است. اثرات سمی داروهای شیمی درمانی یکی از معضالت درمان به شمار می آید لذا دارورسانی به کمک نانوحامل ها به سبب تغییر فارماکوکنتیک دارو و هدف یابی دقیق تر به عنوان یکی از راه کارهای خوش آتیه در درمان سرطان و بیماری های صعب العالج مطرح است. مواد و روش ها: نانوذرات مغناطیسی آهن با روش هم رسوبی ساخته شد. سپس با استفاده از روش آب دهی فیلم نانو ذرات لیپوزومی حاوی پاکلی تاکسل و نانو ذرات مغناطیسی آهن تهیه گردید. نانوذرات از نظر اندازه پتانسیل زتا کپسوالسیون دارو و میزان رهش دارو و میزان سایتوتوکسیسیتی نانو ذرات حاوی دارو با استفاده از آزمون MTT بر روی رده سلولی سرطان تخمدان A2780CP مورد بررسی قرار گرفت. يافته ها: میزان کپسوالسیون دارو در نانو ذرات لیپوزومه مغناطیسی و لیپوزوم به ترتیب 97 و 96 درصد برآورد شد. مطالعه های رهش نشان دهنده رهش پیوسته و کنترل شده دارو از نانو ذرات لیپوزومه مغناطیسی بود. نتایج MTT نیز نشان داد نانو ذرات لیپوزومه مغناطیسی حاوی پاکلی تاکسل نسبت به نانو ذرات لیپوزومی حاوی دارو سایتوتوکسیسیتی باالتری علیه سلول های A2780CP اعمال کردند. بحث: نانو ذرات بارگیری شده با داروهای ضدسرطان نسبت به داروی استاندارد می توانند به راحتی به غشاء سلول رسيده و غلظت دارو را در سطح سلول باال ببرند که این روند باعث باالرفتن غلظت دارو در داخل سلول شده و افزایش اثر دارو را به همراه دارد. نتیجه گیری: نتایج حاصل از مطالعه نشان داد نانو ذرات لیپوزومه مغناطیسی نسبت به نانو ذرات لیپوزومی حامل مناسبی برای تحویل داروی پاکلی تاکسل به سلول های سرطان تخمدان A2780CP هستند. کلمات کلیدی : سرطان تخمدان نانو ذرات لیپوزومه مغناطیسی پاکلی تاکسل سایتوتوکسیسیتی مقدمه استفاده پزشکی از پودرهای مغناطیسی به دوران یونان باستان و روم بر می گردد ولی به شکل اصولی و تحقیقاتی از سال ١٩٧٠ در علوم بیولوژی و پزشکی مورد استفاده قرار گردید. )10( نانو ذرات مغناطیسی یکی از مهم ترین و پرکاربردترین انواع نانو مواد می باشند که ویژگی های منحصر به فردشان موجب نویسنده مسئول : تهران انستيتو پاستور ايران بخش پايلوت نانوبيوتكنولوژي پست الکترونیکی azimakbarzadeh1326@gmail.com تاریخ دریافت مقاله: 1394/10/19 تاریخ پذیرش: 1394/12/03 ایجاد کارایی های خاص آن ها نسبت به سایر نانو ساختارها می شود. زیست سازگارپذیری باال سمیت کم و قابلیت هدایت تحت میدان مغناطیسی از علل کاربرد زیاد نانو ذرات مغناطیسی اکسید آهن است. )13 1( نانو ذرات اکسید آهن در مقادیر کم تر از 100 μg/ml غیر سمی گزارش شده است. )12( طبق نتایج حاصل از کشت سلول و تحقیقاتی که بر روی نانو ذرات اکسید آهن روی کارسینوم تخمدان صورت گرفته نتایج اثر هم افزایی نانوذره اکسید آهن بر کشندگی دارو را به اثبات رساند. )9( نانو ذرات مغناطیسی با ایجاد شار مغناطیسی با دمای باال )اثر هایپرترمی( باعث مرگ سلول های سرطانی می شوند. حالتی که در آن نانو ذرات مغناطیسی تحت تاثیر میدان مغناطیسی متناوب با فرکانس باال گرما تولید می کنند با در نظرگرفتن این واقعیت که سلول های

2 تازه های بیوتکنولوژی سلولی - مولکولی دوره ششم شماره بیست و چهار - ارزیابی کارایی نانو... سرطانی در دمای C به طور برگشت ناپذیری از بین 1 می روند. )11 7( پلی مرهای آب دوست مثل پلی اتیلن گلیکول )PEG( به عنوان اصالح کننده های سطحی در این ساختارها به کار می روند که در این صورت این نانو ذرات نیمه عمر طوالنی تری دارند و رهاسازی دارو در بدن طی مدت زمان بیش تری انجام می گیرد. )8( سرطان عبارت است از ناهماهنگی میان رشد و مرگ سلول ها که نتیجه آن انباشته شدن تعداد بیش از حد سلول ها است. آمار سازمان بهداشت جهانی نشانگر این است که یک زن از هر ۵۵ زن در جهان در مقطعی از زندگی اش با این سرطان دست و پنجه نرم می کند. به طور معمول این بیماری زنان باالی ۵۰ سال را درگیر می کند. در مطالعه حاضر سرطان مورد نظر ما سرطان تخمدان با رده سلولی A2870CP است. به دليل تشخيص دير هنگام سرطان تخمدان و عدم شيوه هاي درماني مؤثر اين بيماري از نظر تلفات در بين سرطان هاي زنان بيش ترين مرگ و مير را دارد. روش های درمان به طور معمول به سه دسته عمده تقسیم می شوند: جراحی شیمی درمانی و اشعه درمانی که تمامی این روش ها مشکالت و عوارضی را در پی دارد. نانو ذرات در تالش هستند که این اثرات منفی را به حداقل برسانند. يكي از داروهاي مورد استفاده در درمان سرطان پاكلی تاكسل است. با وجود اثر درماني پاكلي تاكسل شيمي درماني اين دارو دو مشكل عمده به همراه دارد كه يكي مسير پاكسازي آن از خون و ديگري مقاومت دارو است. )14( هم چنین داروی پاکلی تاکسل در روش هایی همانند شیمی درمانی نمی تواند به صورت اختصاصی تنها بر روی سلول های سرطانی تاثیرگذار باشد و به سایر بافت های بدن از جمله مو و گوارش تاثیر سوء می گذارد بنابراین در حال حاضر عامل محدودکننده در شیمی درمانی عدم انتخابی بودن داروها در مقابل سلول های سرطانی 82 است. )3( روش کار مواد فسفاتیدیل کولین تولید شرکت )Belgium(Acros کلسترول و پاکلی تاکسل تولید شرکت Sigma )آمریکا( PEG3350 تولید شرکت کیمیاگران امروز )ایران( اتانول تولید شرکت ویسیان )ایران( و اکسید آهن تولیدی بخش پايلوت نانوبيوتكنولوژي انستیتو پاستور ایران مورد استفاده قرار گرفت. هم چنین سلول A2870CP از بانک سلولی انستیتو پاستور ایران تهيه شد. تهیه نانوذرات اکسید آهن FeCl 2 و در ابتدا نانو ذرات اکسید آهن با استفاده از دو نمک FeCl 3 به روش هم رسوبی به کمک احیاکننده آمونیاک ساخته شد. )15( ساخت نانو ذره لیپوزومه مغناطیسی و لیپوزومه پاکلی تاکسل برای تهیه نانو لیپوزومه مغناطیسی ابتدا لسیتین کلسترول PEG و داروی پاکلی تاکسل )به دلیل اینکه داروی پاکلی تاکسل چربی دوست است و در حالل آلی حل می شود باید در این مرحله اضافه گردد( با مقادیر مشخصی در اتانول 96 درصد بر روی هیتر استیرر حل گردید. سپس با استفاده از روتاری اواپوریتور Germany( )Heidolph. حالل آبی بافر نمکی فسفات )PBS( 2 جایگزین حالل آلی )اتانول( گردید. برای تهیه )1 mg/ml( Fe 3 را در O 4 نانولیپوزومه مغناطیسی نانوذرات PBS ریخته و توسط دستگاه سونیکاتور به طور کامل پراکنده )Disperse( و سپس به ژلوز اضافه و روی هیتر قرار داده شد تا به خوبی مخلوط شود. محلول لیپوزومه پاکلی تاکسل نیز به همین صورت تهیه شد فقط اکسید آهن به آن اضافه نشده است. برای همگن کردن ذرات توسط دستگاه هموژنایزر با دور rpm ۱۳٠٠٠ نانوذرات هموژن شدند و برای کوچک و هم اندازه کردن ذرات سوسپانسیون به مدت ٥ دقیقه در حمام سونیکاتور )60 )HZ. Bandelin Sonorex Digitec سونیکه گردید. تعیین اندازه و پتانسیل زتای نانوذرات توسط دستگاه زتاسایزر U( Malvern Instruments, Malvern, K( اندازه و پتانسیل زتا نانوذرات بررسی شد. میزان به دام افتادگی دارو حال برای تعیین میزان به دام افتادگی دارو در محلول های لیپوزومه و لیپوزومه مغناطیسی باید جذب نوری )OD( هر یک از محلول های مورد نظر مشخص شود برای این منظور ٢ ml از هر یک از محلول ها را درون یک میکروتیوب ریخته و درون سانتریفوژ با دور ۱٤٠٠٠ rpm دمای C ٤ به مدت ۳٠ دقیقه قرار داده شد سپس محلول شفاف رویی برداشته و جذب نوری آن ها در در طول موج 227 نانومتر با دستگاه اسپکتروفتومتر Japan( )Hitachi, خوانده شد. فرمول 1 : جهت رسم منحنی استاندارد محلول هایی با غلظت های متفاوتی از پاکلی تاکسل تهیه و میزان جذب محلول ها با روش اسپکتروفوتومتری در طول موج 227 نانومتر سنجیده شد. بررسی میزان رهایش دارو برای بررسی میزان رهایش دارو یک میلی لیتر از سوسپانسیون 2- Phosphate Buffer Saline (PBS) 1- Polyethylene glycol (PEG)

3 تازه های بیوتکنولوژی سلولی - مولکولی دوره ششم شماره بیست و چهار - پائیز 1395 سارا یوسفی علداشی و همکاران نانوذرات برداشته و درون کیسه دیالیز ریخته شد و به مدت ٤٨ ساعت درون یک استوانه مدرج که حاوی ٢٥ cc بافر PBS بود قرار داده و سپس در فواصل زمانی منظم از محلول بافر PBS داخل استوانه مدرج برداشته درون یک میکروتیوب ریخته و بافر جدید جایگزین آن شد به همین ترتیب طی 48 ساعت نمونه گیری کرده و میزان جذب نمونه ها در طول موج ٢٢٧ نانومتر خوانده و نمودار آن رسم شد. رده سلولي و بررسي رشد سلول سلول مورد استفاده در اين بررسي سلول های سرطان تخمدان A2780CP بود. سلول ها در محیط کشت RPMI 1640 حاوي 10 درصد FBS و آنتي بيوتيك پني سيلين و استرپتومايسين )جهت جلوگيري از رشد باكتريهاي گرم مثبت و منفي( به مدت %5 CO 2 انكوبه شدند. از آنجايي 24 ساعت در شرايط C 37 و كه سلول ها چسبنده بودند جهت جداسازي سلول ها از كف فالسك از محلول تريپسين و EDTA استفاده شد. درصد سلول هاي زنده با رنگ تريپان بلو در تمامي آزمون ها مشخص گرديد كه باالي %80 بود. بررسی اثر سمیت و کشندگی دارو جهت بررسي سميت از روشMTT استفاده شد. البته در اين مطالعه سلول هاي مورد استفاده در فاز لگاريتمي رشد بودند. ابتدا سلول ها از كف فالسك جدا شده و بعد از سانتريفوژ سلول به هركدام از چاهك هاي پليت 96 خانه اي اضافه %5 CO 2 شد. سپس پليت به مدت 24 ساعت در دماي 37 C و انكوبه گرديد. روز بعد محلول هاي دارويي آماده شده با رقتهاي مختلف به سلول ها اضافه گرديد و دوباره در شرايط بهينه فوق به مدت 48 ساعت انكوبه گرديد. سرانجام 100 ميكروليتر محلول MTT به تمامي چاهك ها اضافه شد و به مدت 3 ساعت انكوبه گرديد. بعد از سپري شدن زمان فوق و تشكيل كريستال هاي فورمازان آن ها را در ايزوپروپانول حل نموده جذب نمونه ها IC 50 با استفاده از را در طول موج 540 nm قرائت شد. ميزان نرم افزار. Springer-Verlag ) Pharm-PCS statistical package )New York محاسبه گرديد. نتايج تعیین اندازه و پتانسیل زتای نانو ذره لیپوزومه مغناطیسی میانگین قطر نانوذرات لیپوزومه مغناطیسی پاکلی تاکسل 251 نانومتر و برای نانولیپوزومه پاکلی تاکسل ۱٩٧/٨ و هم چنین پتانسیل زتای لیپوزومه مغناطیسی پاکلی تاکسل ۳/١٩- و برای نانولیپوزومه پاکلی تاکسل ١٩/٨- میلی ولت گزارش گردید. تعیین میزان محصورسازی )کپسوالسیون( دارو برای بررسی میزان به دام افتادگی و میزان کپسوالسیون دارو ابتدا نمودار غلظت )منحنی استاندارد( رسم شد و معادله خط مربوطه که نشان دهنده رابطه ی میان غلظت و جذب است مشخص گردید y = x نمودار غلظت پاکلی تاکسل OD CON(mg/ml) شكل 1: منحنی استاندارد داروی پاکلی تاکسل طبق نمودار رسم شده معادله غلظت به دست آمده برابر بود با: فرمول 0X/0824 :2 = OD 58/697 + OD میزان جذب محلول ها است که توسط دستگاه اسپکتروفتومتر اندازه گیری می شود. از طریق فرمول و محاسبات گفته شده میزان کپسوالسیون برای نانولیپوزومه مغناطیسی ٠۱/ ٩٧ درصد و برای نانولیپوزومه ٩٦/٤٦ درصد محاسبه شد. بررسی سمیت دارو برای بررسی سمیت دارو بر روی رده سلولی نام برده شده از روش MTT استفاده شد. نتایج به صورت زیر محاسبه گردید. محلول های مورد نظر داروي نانولیپوزومه مغناطیسی داروي نانولیپوزومه IC 50 میزان ١/٨٨٤ ٢/١٤٢ IC 50 داروي نانوليپوزومه مغناطيسي و نانوليپوزومه جدول 1 : میزان شكل 2: نمودار درصد حيات سلولي در مجاورت نانولیپوزومه مغناطیسی حاوی پاکلی تاکسل و نانولیپوزومه پاکلی تاکسل همان طور که شکل 2 نشان می دهد این نمودار بر اساس مقادیر 83

4 تازه های بیوتکنولوژی سلولی - مولکولی دوره ششم شماره بیست و چهار - ارزیابی کارایی نانو... زیست پذیری )viability( و بر اساس غلظت )concentrate( رسم ICکم 50 تر باشد نشان دهنده این است که گردید. هرچه میزان ما برای از بین بردن نیمی از سلول های سرطانی مورد نظر به میزان دوز داروی مصرفی کم تری احتیاج داریم و همین طور 84 که در نمودار و جدول مشاهده می کنید میزان IC برای داروي 50 نانولیپوزومه مغناطیسی از همه کم تر است پس هدفمندتر است و به میزان داروی مصرفی کم تری احتیاج است. بررسی میزان رهایش دارو نتایج رهایش حامل ها همان طور که در نمودار به وضوح پیداست نشان می دهد که نانوذرات لیپوزومه رهایش سریع تری از پاکلی تاکسل نسبت به نانوذرات لیپوزومه مغناطیسی حاوی دارو داشته در نتیجه نانوذرات لیپوزومه مغناطیسی مدت زمان بیش تری دارو را در بدن حفظ می کنند و رهایش کندتری از دارو اتفاق می افتد که مفیدتر است. شکل 3: رهایش پاکلی تاکسل از تركيب نانولیپوزومه شکل 4: رهایش پاکلی تاکسل از تركيب نانولیپوزومه مغناطیسی بحث سرطان بیماری است که از تکثیر غیرطبیعی سلول های بدن شروع می شود. سرطان تخمدان به دليل تشخيص ديرهنگام و عدم شيوه هاي درماني مؤثر از نظر تلفات در بين سرطان هاي زنان بيش ترين مرگ و مير را دارد. سازگاری مناسب خونی نانوذرات بارگذاری شده با دارو دارای اهمیت زیادی می باشد.)5 2( با وجود اثر درمانی داروی پاکلی تاکسل شیمی درمانی این دارو دو مشکل عمده را به همراه دارد که یکی مسیر پاک سازی آن از خون و دیگری مقاومت دارو است. زیست سازگارپذیری باال سمیت کم و قابلیت هدایت تحت میدان مغناطیسی از علل کاربرد زیاد نانوذرات مغناطیسی اکسید آهن است. کمپلکس دارو- حامل ایجاد شده از طریق تزریق وریدی یا سرخرگی به بدن وارد می شود و با کمک میدان مغناطیسی خارجی امکان هدایت و تغلیظ دارو در محل تومور یا سایر بافت های هدف فراهم می شود. )4( در این تحقیق اثر پاکلی تاکسل نانولیپوزومه و پاکلی تاکسل نانولیپوزومه ی مغناطیسی بر روی رده ی سلولی سرطان تخمدان مورد بررسی قرار گرفت. در ابتدا مرحله ساخت و سنتز نانولیپوزومه و نانولیپوزومه مغناطیسی پاکلی تاکسل صورت گرفت پس از ساخت هر دو لیپوزوم با استفاده از نمودار غلظت استاندارد دارو میزان کپسوالسیون حساب شد که میزان کپسوالسیون در هر دو روش بسیار به هم نزدیک بود. با استفاده از دستگاه زتاسایزر قطر فرموالسیون نانولیپوزومه و نانولیپوزومه ی مغناطیسی اندازه گیری شد. نتایج نشان داد که اندازه ذرات لیپوزومه مغناطیسی کمی بزرگ تر است که این امر می تواند به دلیل وجود ذرات ناپایدار اکسید آهن باشد كه تمايل به تجمع دارند. اثر سایتوتوکسیک پاکلی تاکسل نانولیپوزومه و پاکلی تاکسل نانولیپوزومه ی مغناطیسی با روش MTT مورد بررسی قرار گرفت. نتایج نشان داد که کم IC 50 متعلق به فرموالسیون پاکلی تاکسل نانولیپوزومه ترین مغناطیسی می باشد این بدین معناست که میزان کشندگی سلولی فرموالسیون نانولیپوزومه مغناطیسی از فرموالسیون نانولیپوزومه پاکلی تاکسل بیش تر است و لذا احتیاج به دوز مصرفی کم تری دارد. برای این که مقدار دوز داروی آزاد شده در زمان های مختلف مشخص شود از روش دیالیز استفاده شد. بررسی نمودار میزان رهایش و درصد رهایش نشان دهنده این بود که فرموالسیون نانولیپوزومه مغناطیسی نسبت به نانولیپوزومه پاکلی تاکسل رهایش آهسته تری دارد که این امر می تواند به دلیل وجود ذرات آهن باشد. نانو ذرات بارگیری شده با داروهای ضدسرطان نسبت به داروی استاندارد می توانند به راحتی به غشاء سلول رسيده و غلظت دارو را در سطح سلول باال ببرند که این روند باعث باالرفتن غلظت دارو در داخل سلول شده و افزایش اثر دارو را به همراه دارد. )6 16( نتیجه گیری زیست سازگارپذیری باال سمیت کم و قابلیت هدایت تحت میدان

5 تازه های بیوتکنولوژی سلولی - مولکولی دوره ششم شماره بیست و چهار - پائیز 1395 سارا یوسفی علداشی و همکاران مغناطیسی خارجی از علل کاربرد زیاد نانو ذرات مغناطیسی است. بررسی خواص حامل لیپوزومه مغناطیسی پاکلی تاکسل نشان داد که حامل مورد نظر می تواند به عنوان یک حامل کارآمد با تاثیرات بهتر پا به عرصه تولید و مصرف بگذارد. سپاسگزاری بدين وسيله از استادان گرانقدر جناب آقای پروفسور اکبرزاده و جناب آقای دکتر حیدری نسب و همكاران بخش پایلوت نانوبیوتکنولوژی انستيتو پاستور ايران سرکار خانم زهرا صفاري و مریم فرحناک ضرابی كه در انجام اين تحقيق ما را ياري نمودند قدرداني مي گردد. 85

6 تازه های بیوتکنولوژی سلولی - مولکولی دوره ششم شماره بیست و چهار - ارزیابی کارایی نانو... منابع 1. A.A. Kuznetsov, V.I. Filippov, R.N. Alyautdin, N.L. Torshina, O.A. Kuznetsov,Application of magnetic liposomes for magnetically guided transport of muscle relaxants and anti-cancer photodynamic drugs, J. Magn. Magn. Mater. 225(2001) B.C. Dash, G. Réthoré, M. Monaghan, K. Fitzgerald, W. Gallagher, A. Pandit, The influence of size and charge of chitosan/polyglutamic acid hollow spheres on cellular internalization, viability and blood compatibility, Biomaterials 31 (2010) Benita, S. MicroencapsulationMethods and Industrial Applications, 2nd Edition, USA: CRC Press, (2006). 4. Dobson, J. Magnetic nanoparticles for drug delivery. willy (11 MAY 2006) 5. E.A. Bender, M.D. Adorne, L.M. Colomé, D.S. Abdalla, S.S. Guterres, A.R.Pohlmann, Hemocompatibility of poly(e-caprolactone) lipid-core nanocapsules stabilized with polysorbate 80-lecithin and uncoated or coated with chitosan, Int. J. Pharm. 426 (2012) G.A. Koning, A.M.M. Eggermont, L.H. Lindner, T.L.M. ten Hagen, Hyperthermia and thermosensitive liposomes for improved delivery of chemotherapeutic drugs to solid tumors, Pharm. Res. 27 (2010) G. Glöckl, R. Hergt, M. Zeisberger, S. Dutz, S. Nagel, W. Weitschies, The effect of field parameters, nanoparticles properties and immobilization on the specific heating power in magnetic particle hyperthermia, J. Phys. Cond. Matter 18 (2006) S2935 S Hu, C.M. J., Aryal, S., Zhang, L. Nanoparticle-assisted Combination Therapiesfor Effective Cancer Treatment,Therapeutic Delivery, Vol.1, pp , (2010). 9. Jiang Z., Chen B., Xia G., Wu Q., Zhang Y., Hong T., Zhang W., Cheng J., Gao F., Liu L., Li X. and Wang X.: The reversal effect of magnetic Fe3O4 nanoparticles loaded with cisplatin on SKOV3/DDP ovarian carcinoma cells. International Journal of Nanomedicine.(2009) 4: Kim, J. E., Shin, J. Y. & Cho, M. H. Magnetic nanoparticles: an update of application for drug delivery and possible toxic effects.archives of Toxicology 86, , (2012). 11. K. Tanaka, A. Ito, T. Kobayashi, T. Kawamura, S. Shimada, K. Matsumoto, T. Saida, H. Honda, Heat immunotherapy using magnetic nanoparticles and dendritic cells for T-lymphoma, J. Biosci. Bioeng. 100 (2005) Liu Y., Chen Z., Wang J.: Systematic evaluation of biocompatibility of magnetic Fe3O4 nanoparticles with six different mammalian cell lines. J Nanopart Res Springer M. Yoshida, M. Sato, Y. Yamamoto, T. Maehara, T. Naohara, H. Aono, H.Sugishita, K. Sato, Y. Watanabe, Tumor local chemohyperthermia using docetaxel-embedded magnetoliposomes: interaction of chemotherapy and hyperthermia, J. Gastroenterol. Hepatol. 27 (2012) Mozafari MR & Mortazavi SM. (Eds. Nanoliposomes: From Fundamentals to Recent Developments. Trafford Pub.Ltd,Oxford,UK R. Massart, Preparation of aqueous magnetic liquids in alkaline and acidic media, IEEE Trans. Magn. 17 (1981) Z.S. Al-Ahmady, W.T. Al-Jamal, J.V. Bossche, T.T. Bui, A.F. Drake, A.J. Mason, K.Kostarelos, Lipid-peptide vesicle nanoscale hybrids for triggered drug release by mild hyperthermia in vitro and in vivo, ACS Nano 6 (2012)